实验室常用药品试剂的配置与使用.pdf

1 8 实验室常用药品试剂的制备与使用 一 认识药品规格 纯度规格 简写 标签颜色 级别 特点 实验纯 L R 黄色 四 主成分含量高 纯度较差 杂质含量不做选择 化学纯 C P 蓝色 三 主成分含量高 纯度较高 存在干扰杂质 分析纯 A R 红色 二 主成分含量很高 纯度较高 干扰杂质很低 优级纯 G R 绿色 一 主成分含量很高 纯度很高 有的可作为基准物质 二 染色试剂的配制 1 甲基绿甲基绿 DNA 绿色 和吡罗红吡罗红 RNA 红色 染色剂 配制 a A 液 取甲基绿 2 g溶于 98 mL 蒸馏水中 取吡罗红 G 5 g溶于 95 mL 蒸馏水中 取 6 mL 甲基绿溶液和 2 mL 吡罗红溶液加入到 16 mL 蒸馏水中 置 于棕色瓶中备用 b B 液 是一种缓冲液 由乙酸钠和乙酸混合而成 先取乙酸钠 16 4 g 用蒸馏水溶解至 1000 mL 备用 再取乙酸 12 mL 用蒸馏水稀释至 1000 mL 备 用 取配好的乙酸钠溶液 30 mL 和稀释的乙酸 20 mL 加蒸馏水 50 mL 配成 pH 为 4 8 的 B 液 缓冲液 c 取 A 液 20 mL 和 B 液 80 mL 混合 就是实验中所用的吡罗红甲基绿染 色剂 应该注意的是该试剂应现用现配 2 I2 KI 溶液溶液 淀粉 蓝紫色 蛋白质 黄色 配制 将碘化钾 3g溶于蒸馏水中 待全部溶解后加入碘 1g 振荡使其溶解 将此液保存在棕色玻璃瓶内 2 8 3 苏丹苏丹 或苏丹苏丹 木栓化 角质化细胞壁 红色 脂肪 挥发油 树脂等 红色或淡红色 配制 苏丹 或苏丹 干粉 0 1g与 95 乙醇 10 mL 混合 过滤后再加入 10 mL 甘油 4 1 醋酸洋红醋酸洋红染料染料 染色体 紫红色 配制 将洋红 1 g与 45 醋酸 100 mL 煮沸 2h 左右 并随时注意补充加 入蒸馏水到原含量 冷却后过滤 加入 4 铁明矾溶液 1 2 滴 放入棕色瓶中 备用 5 龙胆紫酸性染料龙胆紫酸性染料 染色质 紫色 配制 取龙胆紫 1 g 溶于少量 2 醋酸溶液中 滴加 2 醋酸溶液 直至 溶液不呈深紫色为止 6 卡宝染色卡宝染色剂剂 染色体 红色 着色深 保存性好 又名苯酚 品红染色剂 配制 a 原液 A 将 3g碱性品红溶于 100 mL 70 的乙醇中 b 原液 B 取原液 A 10 mL 加入到 90 mL 5 苯酸水溶液中 两周内有 效 c 原液 C 取原液 B 55 mL 加入 6 mL 福尔马林和 6 mL 冰醋酸 d 染色剂 取原液 C 10 20 mL 加 45 冰醋酸 80 90 mL 加山梨醇 1 8g 将其配制成 10 20 的苯酚 品红溶液 放置两周后 效果显著 7 本尼迪克本尼迪克溶液溶液 醛糖或醛 黄红色沉淀 又称班氏试剂 配制 a 硫酸铜溶液 在 50 mL 加热的蒸馏水中溶解 8 5g 硫酸铜 b 柠檬酸钠 碳酸钠溶液 在 400mL 蒸馏水中溶解 85g柠檬酸钠和 50g无 水碳酸钠 3 8 c 将硫酸铜溶液缓缓倒入柠檬酸钠 碳酸钠溶液中 边加边搅拌并过滤沉淀 物 8 斐林试剂斐林试剂 醛糖 砖红色沉淀 配制 a 甲液 0 1 g mL NaOH 将 125g 氢氧化钾 钠 和 173g 酒石酸钾钠溶 解在 500mL 蒸馏水中 b 乙液 0 05 g mL CuSO4 将 34 5g 硫酸铜溶于 500mL 蒸馏水中 c 上述两种溶液应分别保存 在检测葡萄糖时 使他们等量混合 加入待 测物的试管内 加热到沸腾 如果有葡萄糖 会形成红色的氧化亚铜沉淀物 9 米伦试剂米伦试剂 含有 Tyr 的蛋白质 红色沉淀 配制 在 60mL 浓硝酸 比重 1 42 中溶解 40g 汞 水浴加温可助溶 溶解后加入两倍体积的蒸馏水稀释 静置澄清后 取其上层的清液备用 10 中性红溶液中性红溶液 活细胞 红色 配制 将 0 1g中性红溶于 100mL 蒸馏水 使用时 再稀释 10 倍左右 11 曙红曙红 Y乙醇乙醇 细胞质 浅红色 配制 将 0 25g曙红溶于 100mL 95 乙醇 12 钌红钌红染色剂染色剂 胞间层 红色 配制 将 5 10mg钌红与蒸馏水 25 50mL 混合 现配现用 13 苯胺蓝溶液苯胺蓝溶液 纤维素细胞壁 鞭毛等 蓝色 配制 将苯胺蓝 1 g溶于 0100mL 35 或 95 的乙醇中 14 间苯三酚溶液间苯三酚溶液 木质素 红色 配制 将间苯三酚 5g溶于 100mL 95 乙醇 溶液呈黄褐色即失效 4 8 15 番红番红染色剂染色剂 细胞壁 花粉外壁和染色质 红色 配制 a 番红水溶液 将 1g番红溶解到 100mL 蒸馏水中 b 番红乙醇 将 1g番红溶解到 100mL 50 或 95 乙醇中 c 苯胺番红乙醇染色液 i 甲液 番红 5g 95 乙醇 50mL ii 乙液 苯胺 20mL 蒸馏水 450mL iii 将甲 乙两种溶液混合后 充分摇均 再过滤 16 固绿溶液固绿溶液 细胞质 细胞壁 亮绿色 配制 a 固绿乙醇溶液 将 1g固绿加入 100mL 95 的乙醇中 b 苯胺固绿乙醇溶液 将 1g固绿加入 40mL 95 乙醇中 再加入 10mL 苯胺 充分摇匀后过滤 17 铁矾铁矾苏木精染液苏木精染液 细胞分裂时染色体 蓝黑色 又称海登汉氏苏木精染色液 甲液 媒染剂 硫酸铁铵 铁矾 2 4g 蒸馏水 100mL 现配现用 乙液 染色剂 苏木精 0 5 1g 95 乙醇 10mL 蒸馏水 90mL 乙液乙液配制 配制 1 苏木精的成熟 将苏木精溶于乙醇中 瓶口用双层纱布包扎 使 其充分氧化 通常在室内放置两个月后方可使用 2 加入蒸馏水 塞紧瓶口 置冰箱中可长期保存 染色步骤 染色步骤 切片需先经甲液媒染 并充分水洗后才能以乙液染色 染色后稍经水洗 再用另一瓶甲液分色至适度 甲液与乙液在任何情况下决不能混合 18 美蓝染液美蓝染液 细菌 活体细胞 蓝色 又称亚甲基蓝染液 配制 取 0 5g美蓝 溶于 30mL95 乙醇中 加 100mL 0 01 氢氧化钾溶液 5 8 保存在棕色瓶内 19 伊红染液伊红染液 细胞质 细胞间质 粉红色 配制 1 伊红水溶液 取 1g伊红 溶于 99mL 蒸馏水中 即成 1 伊红水溶液 2 伊红乙醇溶液 取 1g伊红 溶于 99mL 70 乙醇中 即成 1 伊红 乙醇 溶液 20 革兰氏染液革兰氏染液 革兰氏阳性菌 紫色 革兰氏阴性菌 红色 配制 1 甲液 结晶紫液 a 结晶紫 2g 20mL 95 乙醇 b 草酸铵 0 8g 80mL 蒸馏水 c 将 a 与 b 混合 静置 48 小时后使用 2 乙液 碘液 将 2g碘化钾溶于少量蒸馏水中 然后加入 1g 碘 待碘全 部溶解后 加水稀释至 300 mL 3 丙液 95 乙醇溶液 4 丁液 番红花红液 10mL 2 5 番红花红乙醇溶液 100mL 蒸馏水 5 先用甲液染色 再加乙液固定 后用丙液处理 最后用丁液复染 21 硼砂洋红染液硼砂洋红染液 细胞核 糊粉粒 红色 配制 取 4g硼砂 溶于 96mL 蒸馏水中 再加入 2g洋红 加热溶解后煮沸 30min 静置 3d 用 100mL70 乙醇冲淡 放置 24h后过滤 22 席夫试剂席夫试剂 醛类化合物 紫色 又称品红亚硫酸试剂 配制 称取 0 5g碱性品红 加到 100mL 煮沸的蒸馏水中 再微微加热 5min 不断搅拌 使它溶解 溶液冷却到 50 时过滤 滤液中加入 10mL 1mol盐酸 再冷却到25 时加入0 5g偏重亚硫酸钠 Na2S2O5 或无水亚硫酸氢钠 NaHSO3 把溶液装入棕色试剂瓶内 摇荡后 塞紧瓶塞 放在黑暗中 24h 在溶液颜色退 6 8 到淡黄色时 加入 0 5g活性炭 用力荡 1min 过滤后把滤液贮在棕色试剂瓶内 塞紧瓶塞 滤液应该是无色的 在使用时勿让溶液长时间暴露在空气中和见光 瓶 外用黑紙或暗盒遮光 若溶液变成红色 即失效 23 詹詹纳纳斯绿乙醇饱和溶液斯绿乙醇饱和溶液 线粒体细胞色素 C 氧化酶 蓝绿色 又称健那绿乙 醇饱和溶液 配制 1 詹纳斯绿 B 乙醇饱和染液 取 125mL 詹纳斯绿 B 加入到 62 5mL 无水 乙醇中 搅拌 2 取詹纳斯绿 B 乙醇饱和染液 按 1 30000 比例加蒸水稀释 用来染原生 动物线粒体 3 取詹纳斯绿 B 乙醇饱和染液 按 1 1000 比例加蒸馏水稀释 用来染新鲜 蛙血线粒体 24 黑色素液黑色素液 荚膜 黑色 配制 10g水溶性黑素 100mL 蒸馏水 0 5mL 甲醛 福尔马林 25 1 瑞氏染色液瑞氏染色液 细胞核 紫红色 细胞质 蓝色 又称伊红美蓝染料 配制 称取瑞氏染色粉 6g 放研钵内磨细 不断滴加甲醇 共 600mL 并继续 研磨使溶解 经过滤后染液须贮存一年以上才可使用 保存时间愈久 则染色色 泽愈佳 三 脱水剂 各级乙醇 的配制 所需配制乙醇含量 原有含量 蒸馏水量 mL 乙醇 蒸馏水量 mL 30 95 65 30 65 50 95 45 50 45 70 95 25 70 25 7 8 85 95 10 85 10 四 常用固定液的配制 1 FAA 固定液固定液 适用于一般根 茎 叶 花药 子房组织切片 但对染色 体的观察效果较差 配制 福尔马林 38 甲醛溶液 5mL 冰醋酸 5 mL 70 乙醇 90 mL 幼嫩材料用 50 乙醇代替 70 乙醇 可防止材料收缩 还可加入 5 mL 甘油 丙三醇 以防蒸发和材料变硬 2 FPA 固定液固定液 同 FAA 但效果更好 配制 福尔马林 38 甲醛溶液 5mL 丙酸 5 mL 70 乙醇 90 mL 3 卡诺氏固定液卡诺氏固定液 适用于一般植物组织和细胞的固定 常用于根尖 花药 压片及子房石蜡切片等 配制 无水乙醇 冰醋酸 V V 3 3 有极快的渗透力 根尖材料固定 15 20 min即可 花药则需 1 h左右 此液 固定最多不超过 24 h 固定后用 95 乙醇冲洗至不含冰醋酸为止 如果材料不马 上用 需转入 70 乙醇中保存 4 10 中性缓冲福尔马林中性缓冲福尔马林 配制 磷酸二氢钠 4g 磷酸氢二钠 6 5g 37 甲醛 100mL 蒸馏水 900mL 充分混合 标记 pH 和日期 5 Zenker液液 核固定剂 配制 1 Zenker 贮备液 氯化汞 50g 重络酸钾 25g 硫酸钠 10g 蒸馏水 1000mL 充分混合 稳定性 2 年 2 Zenker 工作液 Zenker 贮备液 95mL 冰醋酸 5mL 3 由于 Zenker 液中含氯化汞 固定后必须脱去汞色素 鲁哥氏碘液 5min 8 8 水洗 5 硫代硫酸钠 5min 水洗并按照染色步骤要求进行染色 4 组织必须用流水冲洗去除重铬酸钾 五 常用透明剂 使材料清净透明 增加组织折光 1 二甲苯 必须脱浄水分 以免发生乳状混浊 为了避免材料收缩 应逐步从无水乙醇过渡到二甲苯中 无水乙醇 无水乙醇 二甲苯 V V 1 1 二甲苯 2 氯仿 会破坏染色 1 5 氯仿 氯仿 V1 无水乙醇 V2 1 4 2 5 氯仿 V1 V2 2 3 3 5 氯仿 V1 V2 3 2 4 5 氯仿 V1 V2 4 1 纯氯仿 两次 六 解离液与离析液 1 解离液 a 盐酸乙醇 95 乙醇 V1 浓盐 V2 1 1 二者混合即成 b 盐酸溶液 i 1mol L 盐酸配方 浓盐酸 相对密度 1 19 82 5mL 用蒸馏水 定容 1000 mL ii 0 2 mol L 盐酸配方 浓盐酸 相对密度 1 19 16 5 mL 用蒸馏 水定容 1000 mL 2 离析液 a 铬酸 硝酸离析液 适用于木质化组织 如导管管胞 纤维 石细胞等 亦可用于草质根 茎成熟组织的解离 10 铬酸液 V1 10 硝酸液 V2 1 1 b 硝酸 氯化钾离析液 硝酸 5 mL 与 1 g氯化钾 加热 5 min