目的基因的功能验证ppt课件.pptx

目的基因的功能验证 减弱该基因在细胞内的作用 基因敲除 RNAi 增强该基因在细胞中的作用 基因的过量表达 1 基于同源重组的方法 2 针对单细胞 微生物 小鼠 3 正负双向筛选法 正选择标记 抗生素抗性基因 负选择标记 致死基因tk 将无毒的核酸类 似物 GANC 转变为毒性物质 4 完全基因敲除的弊端 l基因完全失活 对于看家基因来说 该 基因缺失的突变往往具有致死效应 突 变体不易存活 l改进 条件基因敲除 实现基因敲除在 空间和时间上的可控性 5 空间上的可控 组织特异性敲除 loxP位点 一段34碱基的特定DNA序列 具有方向性 Cre重组酶 介导loxP位点发生重组的酶 6 Cre LoxP系统的基因敲除 7 1 构建条件基因打靶小鼠 将靶基因两端锚定上同向的LoxP位点 2 构建组织特异性Cre转基因鼠 3 将上述两小鼠杂交 得到组织特异性基因敲除小鼠 8 时间上的可控性 用可诱导的启动子调控Cre重组酶的表达 加入诱导物之后 启动子才具有活性 9 针对 DNA 上的 靶位点 根据其 两侧序列设计两 个锌指蛋白分子 10 CRISPR Cas9 在CRISPR Cas系 统里 短片段的 外源DNA分子转 录为crRNA 与 tracrRNA结合 介导了序列特异 性的切割作用 最后在Cas蛋白的 作用下使靶标基 因发生突变 11 反义RNA是指与 mRNA互补的RNA 分子 可直接与 mRNA形成双链 RNA 由于核糖体 不能翻译双链RNA 所以反义RNA可 抑制该mRNA的翻 译 12 如何操作 1 向细胞内转化双链RNA分子 转化上的难度 不能稳定遗传 2 向细胞内转化DNA分子 转录后成为双链RNA 3 将2个DNA分子 分别编码靶基因的正义链和反义链 分别 转入细胞 4 较繁琐 如何只通过转化1个DNA分子 就能实现RNAi 13 基因的过量表达 overexpression 通过强启动子的驱动 使某一功能基因高于正常生理 水平表达 通过检测基因过表达后对某一性状和表型 造成的影响 来推测基因的功能 单细胞 多细胞 在特定组 织中的 定时表达 14 头部 驱动目的基因在特定组织和细胞内的高效表达 15 16