Q_74364851-0•26-2019枯草芽孢杆菌固体制剂

ICS 备案号 成都通威三新药业有限公司企业标准 Q 74364851 0 26 2019 枯草芽孢杆菌固体制剂 2019 09 20 发布 2019 09 27 实施 成都通威三新药业有限公司 发布 Q 74364851 0 26 2019 I 目 次 前 言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 产品命名 1 4 术语和定义 1 5 技术要求 2 3 6 试验方法 3 7 7 检验规则 7 8 8 标签 标志 包装 运输 贮存及保质期 8 Q 74364851 0 26 2019 II 前 言 我公司生产的枯草芽孢杆菌固体制剂作为水质改良制剂 属于外用制剂 本标准按GB T 1 1 标准化工作导则 第1部分 标准的结构和编写 和GB T 1 2 标准中规范性 技术要素内容的确定方法 进行编制 该标准替代Q 74364851 0 26 2016 本标准由成都通威三新药业有限公司 提出 本标准由成都通威三新药业有限公司 起草 本标准由成都通威三新药业有限公司 批准 本标准起草人 程罡 郝勤华 Q 74364851 0 26 2019 1 枯草芽孢杆菌固体制剂 1 范围 本标准规定了枯草芽孢杆菌固体制剂的规范性引用文件 产品命名 术语和定义 技术要求 试验 方法 检验规则以及标签 标志 包装 运输 贮存及保质期等内容 本标准适用于本公司枯草芽孢杆菌固体制剂的生产 流通 销售和检验等环节 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的 凡是注日期的引用文件 仅注日期的版本适用于本文件 凡是不注日期的引用文件 其最新版本 包括所有的修改单 适用于本文件 GB T 191 包装储运图示标志 GB 10648 1999 饲料标签 GB 13078 2001 饲料卫生标准 JJF1070 定量包装商品净含量计量检测规则 3 产品命名 通用名 商品名 枯草芽孢杆菌固体制剂 通威复合芽孢 4 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件 枯草芽孢杆菌固体制剂 该制剂是以优良的枯草芽孢杆菌为菌种 通过酵母膏等试剂配制成的液体培养基发酵 添加载体 低温干燥制得 是一种能够促进水生动物 鱼 虾 蟹 生长 迅速分解水中有机物 降低水中氨氮 亚硝酸盐等含量的水质净化剂 Q 74364851 0 26 2019 2 5 技术要求 5 1 感官指标 感官指标应符合表 1的规定 表1 感官指标 项 目 规定要求 色 泽 淡棕黄色或暗白色粉末 气 味 略带酸腥味 均匀性 色泽均匀 无花斑 无色斑 5 2菌体形态 菌体大小为 0 5 0 6 m 2 5 3 5 m 呈杆状 中生芽孢 芽孢呈椭圆形 芽孢囊不膨大 5 3菌落形态 菌落为圆形 暗白色 边缘呈锯齿状 不透明 表明干燥 菌落不易挑起 5 4枯草芽孢杆菌总数 枯草芽孢杆菌总数 见表2规定 表2 枯草芽孢杆菌固体制剂 规定要求 枯草芽孢杆菌出厂值 2 0 109CFU g 5 5 干燥失重 干燥失重应不得过8 0 5 6 卫生指标 卫生指标符合GB 13078的要求 见表3 表3 卫生指标 项 目 规定要求 铅 5 0 mg kg 砷 2 0 mg kg 沙门氏菌 不得检出 Q 74364851 0 26 2019 3 5 7 杂菌率 杂菌包括好氧细菌和厌氧细菌 其中好氧细菌杂菌率 8 厌氧细菌杂菌率 2 5 8 最低装量 最低装量按照国家技术监督局75号令 定量包装商品计量监督管理办法 执行 6 试验方法 6 1 试剂的要求 所用的水 在未注明其他要求时 均指蒸馏水或去离子水 所用的试剂 在未注明规格时 均为分 析纯 A R 6 2 感官指标的检验 取一定量的通威复合芽孢 置光滑纸上 平铺约5 2 将其表面压平 在明亮处对4 1的各项感官指 标逐项进行检验 6 3 菌种鉴别 6 3 1 菌落形态 6 3 1 1 LB培养基配方 固体LB培养基 酵母膏5g 胰蛋白胨10g 琼脂12g 蒸馏水1000ml pH值7 2 7 4 121 蒸汽灭菌30 分钟 液体LB培养基 不加琼脂 其他同固体LB培养基 6 3 1 2 细菌培养 取样 用无菌生理盐水做梯度稀释至10 8 取0 1 0 2ml样品均匀涂抹接种至LB固体培养基上 30 培养24 48小时 肉眼观察菌落形态 6 3 1 3 菌体形态观察 细菌接种在LB液体培养基 30 培养24小时 涂玻片 干燥 火焰固定 饱和孔雀绿水溶液 7 6 染10分钟 0 5 番红复染30秒 水洗 干燥 油镜观察菌体形态及大小 菌体呈微红色 芽孢呈绿色 6 4 枯草芽孢杆菌总数测定 6 4 1 试验原理 枯草芽孢杆菌经过一定倍数的稀释后能在LB培养基上长出肉眼可见的典型菌落 通过计数 可以得 到每克或每毫升产品中的枯草芽孢杆菌活菌总数 Q 74364851 0 26 2019 4 6 4 2 试验设备与器材 a 分析天平 感量为0 1mg b 震荡器 c 恒温培养箱 d 湿热灭菌锅 e 超净工作台 f 微量移液器 g 各类玻璃器皿 6 4 3 试剂与溶液 0 85 m v 的无菌生理盐水 6 4 4 操作步骤 6 4 4 1 样品的制备 精确称取通威复合芽孢1g 精确至0 001g 转入内装100ml无菌生理盐水和带玻璃珠的三角瓶中 静置20分钟后于摇床上充分振荡30 40分钟 使样品充分混匀备用 6 4 4 2 样品的稀释 吸取5 4 4 1的检液1ml 加有9ml无菌生理盐水的试管中 震荡摇匀 按此操作 至样品溶液稀释到 1 10 6 1 10 7 1 10 8备用 每次操作必须在无菌条件下按无菌检验操作规定方法进行检验 6 4 4 3 细菌的培养 准确吸取上述不同稀释度悬液0 1ml 接种在LB琼脂平板上 再用无菌玻棒在平板上涂抹均匀 设3 个重复和1个空白对照 将涂好的平板静止放置20 30分钟 使菌液渗透于培养基内 然后将平板倒转 30 培养24 48小时至长出典型菌落即可计数 6 4 4 4 细菌的计数 以三个重复的菌落相差不悬殊 每皿菌落数在30 300个之间来确定次操作的准确性 否则需要重新 操作 最终菌落总数取3皿中菌落总数的平均数 以上操作均为无菌操作 样品中细菌含量按下列公式计算 X1 m BA 10 式中 X1 每克样品中活芽孢杆菌数 CFU g A 最终计数的菌落总数平均数 B 稀释倍数 Q 74364851 0 26 2019 5 m 样品的量 g 或 ml 0 1 涂平板时菌悬液的量 0 1ml 6 5 干燥失重 6 5 1 原理 样品在 105 2 直接干燥 所失质量的百分数即为干燥失重 6 5 2 仪器 主要仪器有 a 电热恒温干燥箱 b 分析天平 感量为 0 1mg c 称量瓶 50mm 30mm d 干燥器 用变色硅胶做干燥剂 6 5 3 分析步骤 精密称取 1 0g 精确至 0 0001g 通威复合芽孢样品于已干燥至恒重的称量瓶中 放入 105 2 电热恒温干燥箱内干燥 3 小时 移入干燥器内 冷却后称重 再放入电热恒温干燥箱内 继续干燥 1h 移入干燥器内冷却后称重 直至恒重 6 5 4 计算 X2 01 21 MM MM 100 式中 X2 干燥失重 M1 干燥前恒重称量瓶加样品的质量 g M2 干燥后称量瓶加样品恒重的质量 g M0 恒重称量瓶的质量 g 6 6 卫生指标的测定 卫生指标按照GB 13078执行 6 7 杂菌率的测定 6 7 1 好氧细菌的培养 6 7 1 1 好氧细菌培养基配方 肉汁胨固体培养基 牛肉膏5g 蛋白胨10g 氯化钠10g 琼脂12g 蒸馏水1000ml pH值7 2 7 4 121 蒸汽灭菌30分钟 6 7 1 2 好氧菌计数培养基平板制备 Q 74364851 0 26 2019 6 将灭菌后自然冷却到50 60 的上述培养基在无菌条件下倒入直径为15cm的无菌玻璃培养皿中 培养 基厚度约为5 0mm 待培养基冷却凝固后 密封倒置于4 冰箱中备用 6 7 1 3 好氧细菌培养及计数 样品按本标准第6章第3项规定操作处理 取稀释10 6 10 7倍后的样品悬液0 1ml均匀涂抹在上述培养 平板上 3个培养皿为一组 30 培养24 48小时 肉眼观察菌落形态 计数除枯草芽孢杆菌以外的菌落 最终好氧菌落总数取3皿菌落总数的平均数 按下列公式计算样品中的好氧菌含量 X2 m BA 10 式中 X3 每克样品中好氧细菌的数量 CFU g A 最终好氧菌落总数平均数 B 稀释倍数 0 1 涂平板时菌悬液的量 0 1ml 6 7 1 4 好氧菌杂菌率计算 产品中的好氧菌杂菌率按下列公式计算 Y1 13 1003 XX X 式中 Y1 产品中好氧细菌的杂菌率 X3 每克样品中好氧细菌的数量 CFU g X1 每克样品中活芽孢杆菌数 CFU g 6 7 2 厌氧菌的培养 6 7 2 1 厌氧菌培养基配方 固体硫乙醇酸盐培养基 胰酪蛋白胨 15g 酵母浸出粉 5g 葡萄糖 5g 氯化钠 2 5g L 胱氨酸 或 半胱氨酸盐酸盐 0 5g 硫乙醇酸钠 0 5g 琼脂 12g 0 1 刃天青溶液 或 0 2 美蓝溶液 0 5ml 1 0ml 蒸馏水 1000mL pH 值 7 2 7 4 121 蒸气灭菌 30 分钟 6 7 2 2 厌氧菌计数培养基平板制备 将灭菌后自然冷却到50 60 的上述培养基在无菌条件下倒入直径为15cm的无菌玻璃培养皿中 培养基厚度约为 5 0mm 待培养基冷却凝固后 密封倒置于 4 冰箱中备用 6 7 2 3 厌氧细菌培养及计数 样品按本标准第 6 章第 3 条项规定操作处理 取稀释 10 6 10 7倍后的样品悬液 0 1mL 均匀涂抹在上 述培养平板上 3 个培养皿为一组 30 培养 24h 48h 肉眼观察菌落形态 计数除枯草芽孢杆菌以外的 Q 74364851 0 26 2019 7 菌落 最终厌氧菌落总数取 3 皿中菌落总数的平均数 按下列公式计算样品中好氧菌含量 X4 m 10 BA 式中 X4 每克或每毫升样品中厌氧细菌的数量 CFU g 或 CFU mL A 最终厌氧菌落总数平均数 B 稀释倍数 m 样品的量 g 或 mL 0 1 涂平板时菌悬液的量 0 1mL 6 7 2 4 厌氧菌杂菌率计算 产品中的厌氧菌杂菌率按下列公式计算 Y2 14 1004 XX X 式中 Y2 产品中好氧细菌的杂菌率 X4 每克或每毫升样品中艳阳细菌的数量 CFU g 或 CFU mL X1 产品中枯草芽孢杆菌含量 CFUg 或 CFU mL 6 8 最低装量测定 最低装量用适宜的已经校正且在效期内的计量器具进行测定 7 检验规则 7 1 产品分出厂检验和型式试验 7 1 1 出厂检验 7 1 1 1 本产品需经生产厂的质量检验部门进行检验 合格并签发合格证方可出厂 7 1 1 2 出厂检验项目为 感官 枯草芽孢杆菌总数 干燥失重 7 1 2 型式试验 7 1 2 1 出现下列情况之一时 应做型式试验 a 产品正式投产时 b 原材料 工艺有重大改变 可能影响质量指标时 c 停产 2 个月以上恢复生产时 d 出厂检验结果与上次型式试验结果有较大差异时 e 国家质量技术监督部门提出要求时 Q 74364851 0 26 2019 8 f 每季度至少进行一次 型式检验项目为本标准第 5 章全部项目 7 2 抽样及判定 7 2 1 组批及抽样 本产品以一次投料生产均匀 具有同质性的产品为一批 出厂检验时 从每批产品中随机抽取 用四 分法缩至 2kg 1kg 送检 1kg 留样备检 备样应注明抽样时间 抽样人 贮存条件等 型式试验从出厂 检验合格的产品中随机抽取 1kg 进行 7 2 2 判定 试验中若有不合格项 则应加倍抽样进行复验 若仍有不合格 则判定该批产品为不合格 8 标签 标志 包装 运输 贮存及保质期 8 1 标签 产品的标签应符合 GB 10648 1999 8 2 标志 产品的标志按照 GB T 191 执行 8 3 包装 包装规格 粉剂为 1000g 包装材